連続希釈の実行方法

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• ステージ
• 方法1簡単な希釈を実行する
• 方法2最終希釈係数と濃度を計算する

化学では、希釈とは、特定の溶液の濃度を下げることです。連続希釈とは、希釈係数を迅速に増幅するために、元の溶液を繰り返し希釈することです。このタイプの希釈は、ログスケールの濃度曲線を含むものや特定の培地の細菌密度を計算できるものなど、高度に希釈された溶液と高精度を必要とする実験中に実行されることがよくあります。それらは、生化学、微生物学、薬理学、または化学で非常に頻繁に行われます。

ステージ

方法1簡単な希釈を実行する

1. 
   

   
   適切な希釈液（または希釈液）を決定します。 希釈剤の選択は非常に重要であり、希釈する溶液によって異なります。希釈剤はしばしば蒸留水ですが、体系的ではありません。したがって、細菌または細胞を含む溶液では、代わりに培地が使用されます。連続希釈では、すべてのチューブに同じ希釈液が使用されます。
   • 使用する希釈液がわからない場合は、有能な人から助けを得るか、インターネットで同様の経験のために何をしなければならないかを調べてください。

2. 
   

   
   希釈液9 mlを含むいくつかの試験管を準備します。 これらの試験管は、連続希釈を行うために使用されます。原理は簡単です。開始溶液のサンプルを採取して次のチューブに移し、次にこのチューブのサンプルを採取して次のチューブに入れます。
   • 希釈を開始する前に、後で混乱を避けるために、試験管を事前に識別することをお勧めします。
   • 各チューブでは、前のチューブよりも濃度が10低くなります。最初のチューブには、10番目、2番目、100番目、3番目、1000番目などの希釈溶液が含まれます。希釈液の数を事前に決定して、必要以上のチューブを作らないようにし、希釈液を不必要に無駄にします。

3. 
   

   
   母液で試験管を準備します。 少なくとも2 mlを入れます。連続希釈のストック溶液の最小量は1ミリリットルです。可能な2回目の希釈に2 mlを許可します。このマザーソリューションのチューブでは、「SM」とマークできます。
   • 連続希釈を開始する前に、開始溶液をよく混ぜます。

4. 
   

   
   
   
   最初の希釈を行います。 ストック溶液1 mlを「SM」というラベルの付いた試験管にピペットで入れ、この量をラベルの付いた試験管に移します。 1/10 既に9 mlの希釈液が含まれています。混合して均一な溶液を得る。このチューブには、10 mlの溶液があります：1 mlのストック溶液と9 mlの希釈液。この新しいソリューションは、以前のソリューションの10分の1の集中度です。

5. 
   

   
   2回目の希釈を実行します。 2回目の連続希釈では、ラベル付きチューブ溶液1 mlを吸引します 1/10 チューブに注ぎます 1/100 既に9 mlの希釈液が含まれています。チューブ 1/10 サンプリング前に十分に混合されています。転送が完了したら、チューブをよく混ぜます 1/100。マークされたチューブからのソリューション 1/10 ラベル付きチューブの10倍の濃度 1/100.

6. 
   

   
   必要に応じてこの操作を繰り返します。 この手順は、目的の希釈が達成されるまで、何度でも繰り返すことができます。濃度曲線を含む実験の場合、ユニット、10分の1（1/10）、100分の1（1/100）、または1000分の1（1/1000）に希釈した一連の溶液を取得できます。

方法2最終希釈係数と濃度を計算する

1. 
   

   
   計算する 比 連続希釈後の最終希釈。 希釈の合計比率は、希釈係数と希釈の倍数を乗算することにより得られます。数学的には、式は次のとおりです。 D_トン = D₁ x D₂ x D₃ x ... x D_n個と D_トン 総希釈係数を表し、 D_n個、希釈率。
   • そのため、液体の1/10希釈を連続して4回実行すると仮定します。式で、希釈係数をその値で置き換えます：D_トン = 10 x 10 x 10 x 10 = 10,000
   • 連続希釈の4番目のチューブの最終希釈率は1/10 000です。最後のチューブの溶液の濃度は、元の溶液の濃度よりも10000倍低くなりました。

2. 
   

   
   
   
   希釈後の溶液の濃度を決定します。 連続希釈後の溶液の最終濃度を見つけるには、開始濃度を知る必要があります。式は次のとおりです。 C_{ファイナル} = C_初期/ Aと C_{ファイナル} 希釈溶液の最終濃度を表し、 C_初期、原液の濃度および D、事前に決定された希釈率。
   • それで、1mlあたり1,000,000細胞の濃度で細胞溶液を希釈し、希釈率を1,000に設定した場合、希釈サンプルの最終濃度はどうなりますか？
   • 次の式を使用します。
     • C_{ファイナル} = C_初期/ A
     • C_{ファイナル} = 1 000 000/1 000
     • C_{ファイナル} = 1000セル/ ml

3. 
   

   
   使用する単位に注意してください。 計算を行うときは、常に同じユニットを使用していることを確認してください。したがって、mlあたりの細胞濃度から開始する場合、最終結果もmlあたりの細胞数になります。開始濃度が100万分の1（ppm）の場合、最終濃度は100万分の1になります。